胎鼠大腦皮層神經(jīng)元的原代培養(yǎng)

一、背景
大腦皮層是調(diào)節(jié)軀體運動的高級中樞。它由初級感覺區(qū)、初級運動區(qū)和聯(lián)合區(qū)三部分構(gòu)成。人類大腦皮層的神經(jīng)細胞約有140億個，面積約2200平方厘米，主要含有錐體形細胞、梭形細胞和星形細胞（顆粒細胞）及神經(jīng)纖維。

體外原代培養(yǎng)神經(jīng)元作為神經(jīng)科學(xué)研究的有力手段，越來越受到廣大科研工作者的重視。由于神經(jīng)元是一種高度分化的細胞，動物出生后很少分裂，相對于其它細胞而言，神經(jīng)元在體外更難以存活和生長。因此，體外培養(yǎng)神經(jīng)元要求的培養(yǎng)方法和營養(yǎng)條件均較為特殊。

二、實驗步驟
1. 無菌條件下，從懷孕18天的SD 大鼠腹中取出胚胎放入預(yù)冷的無鈣、鎂平衡鹽溶液中；
2.在解剖顯微鏡下，分離取出胚胎大腦皮層，除去腦膜，剪碎組織（1mm3），加入0.125%胰酶-EDTA 消化液后放入 37℃孵箱內(nèi)消化10 分鐘，期間搖晃一次；
3.去掉上清，加入終止液終止消化，吹打10-15次，不能有氣泡，收集上清；剩余沉淀加入終止液繼續(xù)吹打5-10次;
4.所收集的上清過濾后，將細胞懸液于4℃1000rpm離心10min ，棄上清，管內(nèi)加入新鮮培養(yǎng)液重懸；
5.臺盼藍染色計數(shù)，以 3 x 104cells/孔種入包被的24孔板，37℃，5%CO2，95%飽和濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
6.每周換液兩次，每次半量換液。

                                        1d                                                                                     7d