淺看原代細(xì)胞分離的懸浮細(xì)胞分離方法

　　原代細(xì)胞分離是指將組織分散制成細(xì)胞懸液后從中獲取目的細(xì)胞的過程，獲得高純度、高活性的原代細(xì)胞則是很多細(xì)胞實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵要素之一。

　　原代細(xì)胞是直接取自活組織(例如活組織檢查材料)的細(xì)胞，并建立用于體外生長(zhǎng)。這些細(xì)胞經(jīng)歷了非常少的群體倍增，因此與連續(xù)(腫瘤或人工永生化)細(xì)胞系相比，它們更能代表它們所衍生組織的主要功能成分，使得原代細(xì)胞成為更具代表性的體內(nèi)模型。

　　所以，自己動(dòng)手分離原代細(xì)胞，是非常有必要的。

　　原代細(xì)胞分離方法有許多種：懸浮離心法、直接組織塊法、酶消化法、非酶消化法、機(jī)械分散法等，今天，我們主要來看看常用的方法——酶消化法。

　　原代細(xì)胞分離的懸浮細(xì)胞的分離方法：

　　1、將血液、羊水、胸水或腹水等懸液直接轉(zhuǎn)至離心管中，1000rpm/分鐘離心5分鐘。

　　2、去掉上清，離心沉淀用無鈣、鎂的PBS清洗后1000rpm/分鐘離心5分鐘。此步重復(fù)兩次。

　　3、用培養(yǎng)基重懸，調(diào)整適當(dāng)細(xì)胞濃度后分瓶培養(yǎng)。

　　4、如選用懸液中某種細(xì)胞，可采用離心后的細(xì)胞分層液收獲目的細(xì)胞。

　　重點(diǎn)注意事項(xiàng)：

　　1、使用細(xì)胞分離酶時(shí)，請(qǐng)注意溫度和濕度條件。如蛋白水解酶可以自動(dòng)分解，因此建議在使用前立即將其溶解，并在冰上保存2°C～8°C。

　　2、通常用于細(xì)胞分離的大多數(shù)酶可以直接溶解于平衡鹽溶液或所選緩沖液中。對(duì)于許多細(xì)胞分離中，確保解離期間的組織存活，需要孵育培養(yǎng)基充分氧化并在生理pH下緩沖。95%O2、5%CO2平衡的介質(zhì)來完成。