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3-4周齡雌性大鼠卵巢顆粒細胞的原代培養

更新時(shí)間:2024-06-28      點(diǎn)擊次數:109

1. 3-4周齡雌性SD大鼠,皮下注射孕馬血清促性腺激素Pregnant Mare Serum Gonadotropin,PMSG 60IU,48h后頸椎脫臼處死。

2. 大鼠浸入75%乙醇浸泡5-10分鐘,轉移到通風(fēng)柜中的解剖盤(pán)中。

3. 在距離大鼠脊柱1cm、肋下1cm的交叉位置剪開(kāi)皮膚、肌肉,可見(jiàn)白色的脂肪組織,拉出脂肪組織,可見(jiàn)到粉紅色的卵巢,摘除卵巢。

4. 取卵巢放入預冷的含雙抗的緩沖液中,用緩沖液清洗卵巢三次,去除周?chē)M織及表面包膜。

5. 在解剖顯微鏡下用1mL的注射器刺破卵泡,釋放顆粒細胞。

6. 將懸液通過(guò)70μm篩網(wǎng)過(guò)濾至50ml離心管中,之后200g,離心7min。

7. 計數,種植到24孔板和大皿中。

8. FSHR表達鑒定顆粒細胞。

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