成骨細(xì)胞原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)

      成骨細(xì)胞的來源主要有骨、骨膜、骨髓及骨外組織。及人的胚胎顱骨或新生動(dòng)物的顱骨為成骨細(xì)胞的常用來源。Robey(1985)采用膠原酶處理松質(zhì)骨骨塊以除去結(jié)締組織和骨髓造血組織，再將處理過的骨塊進(jìn)行培養(yǎng)來獲得更純凈的成骨細(xì)胞。將人胚胎顱骨中所獲得的成纖維樣細(xì)胞通過加入β-甘油磷酸鈉誘導(dǎo)分化后培養(yǎng)3周，可見細(xì)胞基質(zhì)鈣化，表明所得細(xì)胞為具有很強(qiáng)分化能力的成骨細(xì)胞。將以乙二胺四乙酸和膠原酶消化胎兒顱骨獲得的細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)其在人工材料上能持續(xù)增殖20倍以上，且具有高ALP活性。取人松質(zhì)骨建立成骨細(xì)胞體外培養(yǎng)模型并得到了大量純化的成骨細(xì)胞。選用成年雌性大鼠松質(zhì)骨在較短時(shí)間內(nèi)得到較多數(shù)量的成骨細(xì)胞。骨膜中的細(xì)胞早已被證實(shí)在適當(dāng)?shù)臈l件下可形成骨和軟骨。Vacanti等(1993)從新生小牛肩胛骨骨膜中分離出成骨細(xì)胞并種植到多孔聚羥乙酸支架上，7～10d后成骨細(xì)胞發(fā)生增殖。
用膠原酶短時(shí)預(yù)消化法從取自新西蘭兔脛骨上端內(nèi)側(cè)面骨膜上短時(shí)間內(nèi)得到高純度的成骨細(xì)胞。骨髓分造血和基質(zhì)兩大系統(tǒng)，其成骨能力來源于基質(zhì)。張銀剛等(2000)采用胎兔長(zhǎng)管骨骨髓細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，證明其有骨細(xì)胞系特性，可作為修復(fù)骨缺損的種子細(xì)胞。周皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成肌細(xì)胞都曾有過向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化的報(bào)道。