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細胞JC-1染色實(shí)驗

簡(jiǎn)要描述:細胞JC-1染色實(shí)驗是伊萊博生物的基礎服務(wù)項目之一,由經(jīng)驗豐富的實(shí)驗人員操作完成。

  • 更新時(shí)間:2023-10-30
  • 廠(chǎng)商性質(zhì):代理商
  • 訪(fǎng)  問(wèn)  量:2725

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JC-1染色JC-1是一種陽(yáng)離子染料,可以在線(xiàn)粒體內聚集,低濃度時(shí)主要以單體(monomer)存在,發(fā)射光以綠光(~525nm)為主;而在高濃度時(shí)則可以形成多聚體(aggregation),發(fā)射光以紅光(-590nm)為主。線(xiàn)粒體本身存在-定的極性(polarization),其外膜為負極,內膜為正極。電位差由Ca2+、Na和H流調控。當線(xiàn)粒體狀態(tài)良好時(shí)對JC-1攝取量少,因而在線(xiàn)粒體內主要以單體的形式存在綠光強度紅光強度的比值較高。在線(xiàn)粒體發(fā)生去極化(depolarization)時(shí),線(xiàn)粒內JC-1的濃度較高,多以多聚體的形式存在,綠光強度/紅光強度的比值降低。JC-1染色的綠光強度/紅光強度僅取決于線(xiàn)粒體的膜電勢(membranepotential),而與線(xiàn)粒體的形態(tài)、體積和密度都無(wú)關(guān),因而能更好地反映線(xiàn)粒體的功能狀態(tài)。由于凋亡發(fā)生的早期存在線(xiàn)粒體的去極性,因此,JC-1 染色被用于檢測調亡的早期發(fā)
生。其實(shí)驗方法如下。
JC-1染色非常簡(jiǎn)單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(1 ~ 5mg/ml),儲存于-20C,用時(shí)以培養液稀釋至10ug/ml 終濃度。對貼壁細胞可以直接棄去培養液,漂洗細胞后直接加入染色液,10-30min 后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀(guān)察。線(xiàn)粒體狀態(tài)好時(shí)細胞以綠色為主,當紅光信號增強時(shí),紅綠相疊,以橙色為主。該染色運用于懸浮細胞時(shí)還可以通過(guò)流式細胞儀進(jìn)行檢測,收集紅/綠
信號強度,計算其強度比。

 

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