簡要描述:細(xì)胞JC-1染色實驗是伊萊博生物的基礎(chǔ)服務(wù)項目之一,由經(jīng)驗豐富的實驗人員操作完成。
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JC-1染色JC-1是一種陽離子染料,可以在線粒體內(nèi)聚集,低濃度時主要以單體(monomer)存在,發(fā)射光以綠光(~525nm)為主;而在高濃度時則可以形成多聚體(aggregation),發(fā)射光以紅光(-590nm)為主。線粒體本身存在-定的極性(polarization),其外膜為負(fù)極,內(nèi)膜為正極。電位差由Ca2+、Na和H流調(diào)控。當(dāng)線粒體狀態(tài)良好時對JC-1攝取量少,因而在線粒體內(nèi)主要以單體的形式存在綠光強(qiáng)度紅光強(qiáng)度的比值較高。在線粒體發(fā)生去極化(depolarization)時,線粒內(nèi)JC-1的濃度較高,多以多聚體的形式存在,綠光強(qiáng)度/紅光強(qiáng)度的比值降低。JC-1染色的綠光強(qiáng)度/紅光強(qiáng)度僅取決于線粒體的膜電勢(membranepotential),而與線粒體的形態(tài)、體積和密度都無關(guān),因而能更好地反映線粒體的功能狀態(tài)。由于凋亡發(fā)生的早期存在線粒體的去極性,因此,JC-1 染色被用于檢測調(diào)亡的早期發(fā)
生。其實驗方法如下。
JC-1染色非常簡單。首先可將成品JC-1以DMSO配成儲存液(1 ~ 5mg/ml),儲存于-20C,用時以培養(yǎng)液稀釋至10ug/ml 終濃度。對貼壁細(xì)胞可以直接棄去培養(yǎng)液,漂洗細(xì)胞后直接加入染色液,10-30min 后在熒光顯微鏡下或者激光共聚焦下觀察。線粒體狀態(tài)好時細(xì)胞以綠色為主,當(dāng)紅光信號增強(qiáng)時,紅綠相疊,以橙色為主。該染色運(yùn)用于懸浮細(xì)胞時還可以通過流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測,收集紅/綠
信號強(qiáng)度,計算其強(qiáng)度比。
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