動(dòng)脈粥樣硬化模型

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis)是CVD常見和基本的病理基礎(chǔ)。動(dòng)脈粥樣硬化的主要病理過程包括血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化、單核細(xì)胞黏附并遷移到內(nèi)膜下、巨噬細(xì)胞吞噬氧化修飾的脂蛋白轉(zhuǎn)化為泡沫細(xì)胞、內(nèi)膜中膜增生,終形成粥樣斑塊或引起血栓堵塞血管,引起缺血性疾病。長期以來，一系列的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，如小鼠、大鼠、家兔、地鼠、鵪鶉、豬和猴子等，被應(yīng)用于動(dòng)脈粥樣硬化的研究。根據(jù)來源，動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型可分為自發(fā)性、誘發(fā)性和基因修飾三大類。

一、自發(fā)性動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型
渡邊兔(Watanabe heritable hyperlipidemie, WHHL)和圣.托馬斯免(St. Thomas's hospital strain, STHS)是家兔自發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的兩個(gè)典型模型。其中,WHHL家兔是自發(fā)低密度脂蛋白受體(lowdensity lipoprotein receptor, LDLr)突變造成內(nèi)源性高膽固醇血癥家免品系，是研究高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化常用的動(dòng)物模型。STHS兔是一種遺傳性脂代謝紊亂的新西蘭兔，應(yīng)用較少。

[造模機(jī)制]WHHL家兔是單基因隱性突變造成LDLr缺陷，普通飲食就可出現(xiàn)高膽固醇血癥和動(dòng)脈粥樣硬化，其臨床特征和病理變化與人家族性高膽固醇血癥非常相似。

二、誘發(fā)性動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型
誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化的經(jīng)典方法主要有兩種:飲食誘導(dǎo)法和血管內(nèi)皮損傷法。
(→)飲食誘導(dǎo)法
不同動(dòng)物對膽固醇的反應(yīng)是*不同的，其中以家兔對膽固醇的反應(yīng)較為敏感，而嚙齒類動(dòng)物(如小鼠、大鼠)對膽固醇幾乎不反應(yīng)。1908年,病理生理學(xué)家Ignatowski用富含動(dòng)物蛋白的飲食飼喂家兔，以此誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化病變,開啟了動(dòng)脈粥樣硬化實(shí)驗(yàn)研究的新時(shí)代。因而,家兔是飲食誘導(dǎo)研究動(dòng)脈粥樣硬化的理想動(dòng)物模型。

[造模機(jī)制]動(dòng)物機(jī)體脂質(zhì)代謝紊亂，血脂升高，容易引起血管內(nèi)皮傷，導(dǎo)致血管內(nèi)皮功能紊亂、通透性增高,終導(dǎo)致血管壁的脂質(zhì)浸潤、形成動(dòng)脈粥樣硬化。因此,通過給實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼喂高脂、高膽固醇飲食，出現(xiàn)高脂血癥，進(jìn)而誘導(dǎo)其主動(dòng)脈及冠狀動(dòng)脈逐漸形成粥樣硬化斑塊。在高脂、高膽固醇飲食中加人少量膽酸鹽，可以增加膽固醇的吸收;加入甲狀腺抑制藥物如甲基硫氧嘧啶.丙基硫氧嘧啶，可進(jìn)一步加速動(dòng)脈病變的形成。

 (二)血管內(nèi)皮損傷法
根據(jù)不同的外力,血管內(nèi)皮損傷法可以分為機(jī)械損傷法和物理生化因子損傷法。前者主要是用球囊導(dǎo)管、鋼絲套圈或金屬絲等來損傷血管內(nèi)皮，而后者則是用化學(xué)藥品、電刺激、空氣干燥或放射線等來損傷血管內(nèi)皮。其中，以球囊損傷法較為常用。

[造模機(jī)制]血管內(nèi)皮損傷是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié),通過外力損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,使血管內(nèi)皮通透性、黏附性、血液凝固改變，造成動(dòng)脈內(nèi)膜損傷或功能障礙，再輔助性飼喂高脂高膽固醇飲食,可誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化形成。

 三、基因修飾動(dòng)脈粥樣硬化動(dòng)物模型
基因敲除小鼠和轉(zhuǎn)基因家免是研究脂蛋白代謝和動(dòng)脈粥樣硬化的重要模型，為模擬人類動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展，研究病理機(jī)制提供了新方法。
(一)基因敲除小鼠
[造模機(jī)制]應(yīng)用胚胎操作技術(shù)和DNA同源重組原理，定向?qū)谢蚱斡没蛉笔翁娲?，從而制備基因蔽除小鼠。?新的基因敲除技術(shù)不斷開發(fā)應(yīng)用，如鋅指核酸酶、TALEN 和CRISPR/Cas9技術(shù)。動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展與脂質(zhì)代謝關(guān)系比較密切,脂代謝中有兩個(gè)重要基因即載脂蛋E(apolipoprotein E, ApoE)和LDLr,它們在膽固醇和甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)過程中起重要作用。其中,ApoE是清除乳糜微粒和極低密度脂蛋白( very low density lipoprotein, VLDL受體的配體，而LDLr是一種細(xì)胞膜表面的糖蛋白。ApoE或LDLr基因的敲除,會(huì)引起血漿中低密度脂蛋白積累和血管重構(gòu)，進(jìn)而導(dǎo)致主動(dòng)脈發(fā)生動(dòng)脈粥樣硬化病變。

 (二)轉(zhuǎn)基因家兔
[造模機(jī)制]家兔品系一般選用新西蘭家兔或日本大耳白家兔。原核顯微注射法是目前制作轉(zhuǎn)基因家兔常用的方法。制作轉(zhuǎn)基因家兔時(shí),將構(gòu)建好的外源基因直接注射到受精卵的雄原核中，然后將攜帶外源基因的受精卵移植到同品系假孕受體雌兔的輸卵管中,就可獲得新生轉(zhuǎn)基因仔兔。