細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)原理是什么？

　　細(xì)胞株的實(shí)驗(yàn)原理：

　　外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)表達(dá)，一類是穩(wěn)定表達(dá)（永表達(dá)） 。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因。建立穩(wěn)定細(xì)胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的藥物對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選。常用的抗性標(biāo)記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin），常用Hygromycin B、G418和puromycin進(jìn)行選擇性篩選。傳統(tǒng)的穩(wěn)定株篩選方法需要通過外源基因的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染后對(duì)靶細(xì)胞進(jìn)行篩選， 終獲得從單一細(xì)胞擴(kuò)增起來(lái)的穩(wěn)定細(xì)胞株， 該方法陽(yáng)性率低，周期長(zhǎng)，工作量大。慢病毒是一種RNA病毒，攜帶的外源基因在病毒感染細(xì)胞后需要逆轉(zhuǎn)錄為DNA，再整合到宿主細(xì)胞基因組以后才能表達(dá)。利用慢病毒必須整合到宿主基因組的特性來(lái)篩選穩(wěn)定株的方法克服了傳統(tǒng)方法的弊端，可以在短時(shí)間內(nèi)獲得高效率的穩(wěn)定細(xì)胞株。篩選得到的細(xì)胞或者可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白，用于蛋白的擴(kuò)增和富集；或者得到穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株。