細胞株的實驗原理是什么？

　　細胞株的實驗原理：

　　外源基因在細胞中的表達可分為兩大類，一類是瞬時表達，一類是穩(wěn)定表達（永表達） 。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達到高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天。后者外源DNA整合到宿主細胞染色體上，使宿主細胞可長期表達目的基因。建立穩(wěn)定細胞株，一般是根據(jù)不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應(yīng)的藥物對靶細胞進行篩選。常用的抗性標記基因有潮霉素（hygromycin）、新霉素（neomycin）和嘌呤霉素（puromycin），常用Hygromycin B、G418和puromycin進行選擇性篩選。傳統(tǒng)的穩(wěn)定株篩選方法需要通過外源基因的瞬時轉(zhuǎn)染后對靶細胞進行篩選， 終獲得從單一細胞擴增起來的穩(wěn)定細胞株， 該方法陽性率低，周期長，工作量大。慢病毒是一種RNA病毒，攜帶的外源基因在病毒感染細胞后需要逆轉(zhuǎn)錄為DNA，再整合到宿主細胞基因組以后才能表達。利用慢病毒必須整合到宿主基因組的特性來篩選穩(wěn)定株的方法克服了傳統(tǒng)方法的弊端，可以在短時間內(nèi)獲得高效率的穩(wěn)定細胞株。篩選得到的細胞或者可穩(wěn)定表達目的蛋白，用于蛋白的擴增和富集；或者得到穩(wěn)定沉默特定基因的細胞株。