神經(jīng)元原代培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟具體如下

　　神經(jīng)元原代培養(yǎng)是一種將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的部分組織，如大腦皮層、海馬、脊髓腦組織等，直接取出后在體外進(jìn)行接種培養(yǎng)的方法。是將胚胎哺乳動(dòng)物中樞神經(jīng)系統(tǒng)的組織取出后，在體外進(jìn)行培養(yǎng)和研究的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。主要用于研究神經(jīng)元的生物學(xué)特性、神經(jīng)發(fā)生、神經(jīng)退行性疾病的機(jī)理等。

　　神經(jīng)元原代培養(yǎng)的培養(yǎng)步驟：

　　1、準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)材料：包括培養(yǎng)基、細(xì)胞培養(yǎng)試劑、培養(yǎng)器具等。

　　2、取材：通過(guò)異交法得到小鼠胚胎，在胚胎發(fā)育第15-17天時(shí)取材。

　　3、分離大腦皮層組織：將小鼠胚胎處死后，迅速取出大腦并置于無(wú)菌的PBS緩沖液中。移除大腦的外圍組織，僅保留皮層組織。

　　4、組織消化：將皮層組織切碎成小塊，加入含有0.05%胰蛋白酶和0.1%DNA酶的消化液，室溫下消化15-20分鐘。

　　5、離心與清洗：將消化液中的細(xì)胞懸液離心處理，用PBS緩沖液洗滌1-2次，去除消化液中的酶和雜質(zhì)。

　　6、細(xì)胞計(jì)數(shù)與分裝：通過(guò)顯微鏡和細(xì)胞計(jì)數(shù)板對(duì)細(xì)胞懸液進(jìn)行計(jì)數(shù)，稀釋并分裝得到所需細(xì)胞濃度。

　　7、接種：將細(xì)胞懸液接種到預(yù)先涂覆了聚-L-賴氨酸的培養(yǎng)皿中，使細(xì)胞均勻附著在培養(yǎng)皿表面。

　　8、添加培養(yǎng)基：加入預(yù)先配制好的培養(yǎng)基，為細(xì)胞提供營(yíng)養(yǎng)和生長(zhǎng)因子。

　　9、培養(yǎng)條件控制：將培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，保持37°C、95%濕度和5%CO?濃度。定期更換培養(yǎng)基以維持細(xì)胞生長(zhǎng)。