線粒體膜電位

一、服務(wù)介紹

　　大量的研究表明線粒體與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認(rèn)為是細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)過(guò)程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細(xì)胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細(xì)胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　JC-1是一種碳氰化合物類陽(yáng)離子熒光染料，可作為檢測(cè)線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細(xì)胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當(dāng)JC-1濃度低或膜電位水平低時(shí)，主要以單體形式存在，激發(fā)波長(zhǎng)為527nm，呈綠色熒光；當(dāng)JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時(shí)，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長(zhǎng)為590nm。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生凋亡時(shí)，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強(qiáng)度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測(cè)線粒體膜電位的變化。

　　三、實(shí)驗(yàn)流程

　　1.細(xì)胞培養(yǎng)；

　　2.用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡，同時(shí)設(shè)立陰性依照組合陽(yáng)性對(duì)照組，收集細(xì)胞；

　　3.用PBS洗滌細(xì)胞三次，收集不多于1×106的細(xì)胞；

　　4.取100μL10×IncubationBuffer加900μL滅菌去離子水稀釋成1×IncubationBuffer，混勻并預(yù)熱至37℃；

　　5.吸取500μL1×IncubationBuffer，加入1μLJC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；

　　6.取500μLJC-1工作液將細(xì)胞均勻懸浮，37℃，5%CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。

　　7.室溫離心（2000rpm,5min）收集細(xì)胞，用1×IncubationBuffer洗兩次；

　　8.吸取500μL10×IncubationBuffer重新懸浮細(xì)胞；

　　9.流式細(xì)胞儀檢測(cè)，分析。

　　四、客戶提供

　　細(xì)胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細(xì)胞)，相關(guān)藥品或MMP檢測(cè)試劑盒（可代購(gòu)）!

　　五、公司提供

　　實(shí)驗(yàn)步驟、結(jié)果圖、數(shù)據(jù)結(jié)果和分析報(bào)告

　　實(shí)驗(yàn)周期：1-2周，具體需要根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況及實(shí)驗(yàn)內(nèi)容而定。