掃描電鏡

　　一、服務(wù)介紹

　　掃描電鏡是1965年發(fā)明的較現(xiàn)代的細(xì)胞生物學(xué)研究工具，它具有制樣簡(jiǎn)單、放大倍數(shù)可調(diào)范圍寬、圖像的分辨率高、景深大等特點(diǎn)。近年來(lái)，掃描電鏡已廣泛地應(yīng)用在生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、等學(xué)科的領(lǐng)域中。

　　二、實(shí)驗(yàn)原理

　　主要是通過(guò)發(fā)射電子聚焦光束來(lái)掃描樣品的表面形態(tài).電子束與樣品表面的樣子發(fā)生作用,產(chǎn)生多種能夠被檢測(cè)的信號(hào),這些信號(hào)就包含了樣品的表面形態(tài)和組成.染色。

　　三、實(shí)驗(yàn)流程

　　1.樣品的初步處理

　　a.取材樣品面積可達(dá)8mm×8mm，厚度可達(dá)5mm。對(duì)于易卷曲的樣品如血管、胃腸道粘膜等，可固定在濾紙或卡片紙上，以充分暴露待觀察的組織表面。

　　b.樣品的清洗

　　(1)用等滲的生理鹽水或緩沖液清洗；

　　(2)用5%的蘇打水清洗；

　　(3)用超聲震蕩或酶消化的方法進(jìn)行處理。

　　c.固定

　　固定所用的試劑和透射電鏡樣品制備相同，常用戊二醛及鋨酸雙固定。由于樣品體積較大，固定時(shí)間應(yīng)適當(dāng)延長(zhǎng)。也可用快速冷凍固定。

　　d.脫水

　　樣品經(jīng)漂洗后用逐級(jí)增高濃度的酒精或丙酮脫水，然后進(jìn)入中間液，一般用醋酸異戊酯作中間液。

　　2.樣品的干燥

　　a.空氣干燥法

　　空氣干燥法又稱自然干燥法，就是將經(jīng)過(guò)脫水的樣品，讓其暴露在空氣中使脫水劑逐漸揮發(fā)干燥。這種方法的大優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便易行和節(jié)省時(shí)間；它的主要缺點(diǎn)是在干燥過(guò)程中，組織會(huì)由于脫水劑揮發(fā)時(shí)表面張力的作用而產(chǎn)生收縮變形。因此，該方法一般只適用于表面較為堅(jiān)硬的樣品。

　　b.冷凍干燥法

　　(1)置于冷凍保護(hù)劑中：將樣品置于冷凍保護(hù)劑中浸泡數(shù)小時(shí)。常用的冷凍保護(hù)劑為10%～20%二甲基亞砜水溶液，或15%～40%甘油水溶液。

　　(2)驟冷：將經(jīng)過(guò)保護(hù)劑處理的樣品迅速投入用液氮預(yù)冷至(150℃的氟利昂冷凍劑中，使樣品中的水分很快凍結(jié)。

　　(3)干燥：將已凍結(jié)的樣品移到冷凍干燥器內(nèi)已預(yù)冷的樣品臺(tái)上，抽真空，經(jīng)幾小時(shí)或數(shù)天后，樣品即達(dá)到干燥。本方法不需要脫水，避免了有機(jī)溶劑對(duì)樣品成分的抽提作用，不會(huì)使樣品收縮，也是較早使用的方法。但是，由于花費(fèi)時(shí)間長(zhǎng)，消耗液氮多，容易產(chǎn)生冰晶損傷，因此未被廣泛應(yīng)用。

　　3.樣品的導(dǎo)電處理(真空鍍膜法)

　　真空鍍膜法是利用真空膜儀進(jìn)行的。其原理是在高真空狀態(tài)下把所要噴鍍的金屬加熱，當(dāng)加熱到熔點(diǎn)以上時(shí)，會(huì)蒸發(fā)成極細(xì)小的顆粒噴射到樣品上，在樣品表面形成一層金屬膜，使樣品導(dǎo)電。噴鍍用的金屬材料應(yīng)選擇熔點(diǎn)低、化學(xué)性能穩(wěn)定、在高溫下和鎢不起作用以及有高的二次電子產(chǎn)生率、膜本身沒(méi)有結(jié)構(gòu)?，F(xiàn)在一般選用金或金和碳。為了獲得細(xì)的顆粒，有用鉑或用金-鈀、鉑-鈀合金的。金屬膜的厚度一般為10nm～20nm。真空鍍膜法所形成的膜，金屬顆粒較粗，膜不夠均勻，操作較復(fù)雜并且費(fèi)時(shí)，目前已經(jīng)較少使用。4.拍攝

　　四、客戶提供

　　組織、細(xì)胞

　　五、公司提供

　　基本實(shí)驗(yàn)步驟、藥品、樣品處理、圖片及圖片分析

　　實(shí)驗(yàn)周期：3-4周