腫瘤細胞侵襲實驗

腫瘤細胞侵襲實驗( TumourlnvasionAssay)可以: (1) 研究各種細胞因子對惡性腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移的影響;(2)--些抑制血管生成的新藥研究;(3)研究腫瘤細胞侵襲和轉(zhuǎn)移機制。

 Matrigel是從小鼠EHS肉瘤中提取的基質(zhì)成分，含有LN、IV 型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，鋪在無聚乙烯吡硌烷酮的聚碳酸酯濾膜上，能在DMEM培養(yǎng)基中重建形成膜結(jié)構(gòu)，這種膜結(jié)構(gòu)與天然基質(zhì)膜結(jié)構(gòu)極為相似。
濾膜孔徑一般為8um，而且膜孔都被Matrigel覆蓋，細胞不能自由穿過，必須分泌水解酶，并通過變形運動才能穿過這種鋪有Martrigel的濾膜，這與體內(nèi)情況較為相似。鋪有Martrigel的濾膜放在以Blind Well腔或MICS腔上下室之間，鋪有Martrigel面朝向上室，在下室中加有趨化劑，如一定濃度的LN、FN或小.鼠3T3條件培養(yǎng)液或人睪丸上皮成纖維細胞培養(yǎng)液，上室加入重懸的瘤細胞，具有侵襲能力的細胞在趨化劑誘導下開始穿膜運動。細胞穿膜所用的時間與Martrigel的用量有關(guān)，選擇25ugMartrigell鋪膜，16 小時后觀察結(jié)果較為合適。穿過濾膜的細胞多數(shù)粘附在濾膜下表面，可用棉簽將上表面的細胞拭去，然后用乙醇固定濾膜，PE染色，在光鏡下觀察統(tǒng)計穿過Martrigel的細胞數(shù)。另外用Transwell小室也可進行重建基質(zhì)膜侵襲分析,這一方法是在Transwell小室吊籃式上腔的濾膜.上鋪_ 上30ugMartrigel,加入細胞72h后觀察結(jié)果。值得注意的是，細胞在TransWlI腔中培養(yǎng)72小時后，有相當數(shù)量穿過濾膜的細胞不再粘附在濾膜下表面，而是脫落進人下腔溶液中.因此統(tǒng)計穿過基質(zhì)膜的細胞數(shù)目時應(yīng)把這部分細胞考慮在內(nèi)。腫瘤細胞穿過重建基質(zhì)膜的能力與它的體內(nèi)侵襲轉(zhuǎn)移能力表現(xiàn)出較好的相關(guān)性，可以用重建基質(zhì)膜模型初篩抗侵襲藥物。在上述分析中，如果不在膜上鋪Martrigel而直接將8um孔徑濾膜安放在侵襲腔室.上下腔室之間，細胞通過變形運動穿過濾膜，用這種模型對分析細胞運動能力和藥物對細胞運動能力的影響。另外，在下室中加有LN或FN或在濾膜下表面鋪上LN或FN，可分析藥物對腫瘤細胞的趨化性或趨固性的影響。