免疫沉淀實驗技術服務

簡要描述：免疫沉淀法是一種研究蛋白質間交互作用的生物技術，這種技術是將蛋白質視為抗原，并利用抗體與之進行特異性結合的特性，來進行研究。上海伊萊博致力于臨床前藥效學CRO實驗，多年的免疫沉淀實驗技術服務的經驗，為廣大藥效學實驗提供保障。

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詳細信息：

1. 表面標記或生物合成標記的細胞在裂解緩沖液中于4℃放置1 h 后，再于4℃3 000 g 離心10 min 除去細胞核，然后將所得上清在10000 g 離心1 min。

2. 一次性對上清進行預處理，每200 μl 上清加入10 μl 活化后被淬滅的瓊脂糖對照。在旋轉揺床中室溫揺蕩2 h 或在4℃過夜。200 g 離心1 min，保留上清。

3. 在1.5 ml 的微量離心管中加滿裂解液室溫作用10 min，對其進行預包被。吸去液體后，加入105~106 cpm 的含抗原的放射性標記上清，加稀釋緩沖液使終體積為200 μl。

4. 加入10 μl 1：1的抗體-Sepharose偶聯(lián)物膠漿/稀釋緩沖液。4℃在旋轉搖床中搖蕩1. 5~3 h，一直保持Sepharose呈混懸狀。

5. Sepharose偶聯(lián)物依次用1 ml 下面列出的緩沖液洗滌。毎次洗完后，200 g 離心5 min 或微量離心5 s。以細頭的巴斯德吸管小心吸去上清，僅在沉淀的上面留10 μl 的液體。在第4次洗滌后，離心甩下管壁所有殘余液滴并將其吸去，沉淀上僅留下約 10 μl。

6. 加入20~50 μl SDS樣品緩沖液。由于樣品緩沖液比重大于洗滌緩沖液，它可滲透到Sepharose中，不要用旋渦混合器旋起SEpharose，以免使之粘附在緩沖液液面以上的管壁。蓋緊蓋子，于100℃保溫5 min。

7. 用旋渦混合器混勻，200 g 離心或微量離心5 s。將上清加樣于凝膠以SDS-PAGE分析，使用增感屏進行放射自顯影或熒光自顯影或檢測標記蛋白質。

伊萊博生物擁有專業(yè)的技術支持和實驗操作人員團隊，核心成員來自中科院、復旦、交大、同濟等國內重點高校及科研機構，能夠提供前沿的、完善的實驗技術咨詢與服務。

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