簡(jiǎn)要描述:腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建:臨床上人類腎小管間質(zhì)纖維化是多種慢性非腫瘤性腎臟疾病長(zhǎng)期遷延,最終導(dǎo)致慢性腎功能衰竭的主要病理基礎(chǔ),它以腎小管損傷、腎間質(zhì)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、纖維化為主要特征。由于人類腎問質(zhì)纖維化的臨床病程漫長(zhǎng),病因復(fù)雜,加上病理取材的限制,對(duì)其病理過程進(jìn)行動(dòng)態(tài)研究較為困難
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腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建方法
體重為250~300g的成年大鼠,經(jīng)腹腔注射5%水he氯醛麻醉,麻醉后取仰臥位固定于手術(shù)板上。動(dòng)物腹部手術(shù)區(qū)常規(guī)消毒及去毛,沿腹中線作手術(shù)切口,依次切開皮膚和肌肉,游離腎臟和輸尿管,用組織qian托起左側(cè)輸尿管中段部位,止xue鉗夾住,在兩端用4-0號(hào)絲線分兩次結(jié)扎左側(cè)輸尿管近腎盂段,剪斷輸尿管,然后常規(guī)縫合肌肉和皮膚。術(shù)后動(dòng)物常規(guī)單籠飼養(yǎng)觀察,自由飲水及進(jìn)食。于術(shù)后第7, 14, 21, 28日動(dòng)物麻醉后右股動(dòng)脈放血處死,分離血清作生化測(cè)定;處死前1d在禁食不禁水的條件下,收集大鼠24h尿液測(cè)尿量。取左腎組織標(biāo)本經(jīng)固定液固定后,作常規(guī)組織切片,光鏡下觀察。腎小管間質(zhì)病變由3個(gè)參數(shù)判定:蛋白管型和腎小管的擴(kuò)張;間質(zhì)炎細(xì)胞的浸潤(rùn);間質(zhì)纖維化的程度。每個(gè)參數(shù)按0~3分評(píng)定:0分:正常;1分:輕度受損;2分:中度受損;3分:重度受損。
腎小管間質(zhì)纖維化模型構(gòu)建特點(diǎn)
模型大鼠手術(shù)后,短期內(nèi)(術(shù)后7~14d)動(dòng)物可出現(xiàn)血清尿素氮、肌酐測(cè)定值明顯升高;術(shù)后21~28d,血清中尿素氮、肌酐反而下降,但28d時(shí)動(dòng)物血清肌酐值仍高于手術(shù)前。表明單側(cè)輸尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction, UUO)后腎功能有一個(gè)急性失代償?shù)街饾u通過對(duì)側(cè)腎臟代償,最后對(duì)側(cè)腎臟亦失代償?shù)淖兓^程,此變化與輸尿管梗阻后引起機(jī)體腎內(nèi)壓、腎臟血流動(dòng)力學(xué)和腎小球?yàn)V過壓改變有關(guān)。術(shù)后28d內(nèi),24h尿蛋白排泄量無明顯增加。鏡下病理組織學(xué)觀察結(jié)果顯示,術(shù)后3d時(shí),腎組織內(nèi)已出現(xiàn)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)、細(xì)胞增殖、小管擴(kuò)張等病理變化,此后動(dòng)物可發(fā)生進(jìn)行性腎小管wei縮及間質(zhì)纖維化,但腎小球組織結(jié)構(gòu)無明顯病理損傷;PAS染色可見腎組織內(nèi)彌漫性腎小管基底膜增厚皺縮,馬森(Masson)染色可見腎皮質(zhì)區(qū)、皮髓交界處發(fā)生明顯纖維化。模型制作方法簡(jiǎn)便,制作時(shí)間短,重復(fù)性較好,腎間質(zhì)纖維化發(fā)展迅速,可觀察到腎臟細(xì)胞轉(zhuǎn)分化過程。
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