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質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 將質(zhì)粒 DNA 導(dǎo)入細菌的過程稱為轉(zhuǎn)化( Transformation )。此感受態(tài)細菌細胞在 CaCl 2 低滲溶液中膨脹為球狀(感受態(tài)細菌的制備,見前)。質(zhì)粒 DNA 與 CaCl 2 形成抗 DNase 羥基 - 磷酸鈣復(fù)合物黏附于細菌表面,經(jīng) 42℃ 短時間熱沖擊處理,促進細胞吸收 DNA 復(fù)合物。在豐富培養(yǎng)基上生長數(shù)小時后,球狀細胞復(fù)原并分lie增殖。
PCR技術(shù)是模擬體內(nèi)DNA的天然復(fù)制過程,在體外擴增DNA分子的一種分子生物學技術(shù),主要用于擴增位于兩段已知序列之間的DNA區(qū)段。在待擴增的DNA片段兩側(cè)和與其兩側(cè)互補的兩個寡核苷酸引物,經(jīng)變性、復(fù)性和延伸若干個循環(huán)后,DNA擴增2?倍。
酶聯(lián)免疫吸附測定(Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay,ELISA)是免疫學和分子生物學中廣泛使用的實驗室技術(shù),由Eva Engvall和 Peter Perlmann 于1971 sc描述。該測定依賴于抗原-抗體相互作用的原理,并利用酶和比色檢測來量化目標分子,主要用于檢測和量化生物樣品中特定蛋白質(zhì)、肽、抗體或抗原的存在。ELISA測定通常應(yīng)用于各個領(lǐng)域,包括臨床
免疫印跡(immunoblotting)又稱蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對蛋白進行定性和半定量分析。
免疫共沉淀(Co-Immunoprecipitation,CoIP)是研究蛋白-蛋白間相互作用的經(jīng)典方法,屬于免疫沉淀技術(shù)的一類,常被用于鑒定特定蛋白復(fù)合物的中未知蛋白組分。免疫共沉淀的設(shè)計理念是,假設(shè)一種已知蛋白是某個大的蛋白復(fù)合物的組成成員,那么利用這種蛋白的特異性抗體,就可能將整個蛋白復(fù)合物從溶液中“拉”下來(常說的“pull-down”),進而可以用于鑒定這個蛋白復(fù)合物中的其他未知成員
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