動物組織勻漿制備實驗

1、取組織塊(0.2g 1g)少可到2~5mg,在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱
重，放入5或10m1的小燒杯內(nèi)
2、用移液管量取預(yù)冷的勻漿介質(zhì)或者用0. 86%冷生理鹽水，勻漿1 )質(zhì)或生理鹽水的體積總量應(yīng)該是組織塊重量的9倍,用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿^質(zhì)或生理鹽水于燒杯中,用眼科小剪盡快剪碎組織塊(天然時操作要在冰水浴中進(jìn)行,將盛有組織的小燒杯放入冰水中)。

3、勻漿的方式有多種:手工勻漿、機(jī)器勻漿、超聲勻漿、反復(fù)凍融。
手工勻漿:將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中,再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進(jìn)行勻漿,左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次(6~8分鐘) ,充分研碎，使組織勻漿化。
機(jī)器勻漿:用組織搗碎機(jī)10000~ 15000r /min上下研磨制成10%組織勻漿，也可用內(nèi)切式組織勻漿
機(jī)制備(勻漿時間10秒/次，間隙30秒，連續(xù)3~5次,在冰水中進(jìn)行) ,皮膚、肌肉組織等可延長勻漿時間。
超聲粉碎:用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲 波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒
使細(xì)胞破碎,也可用國產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用40安培，5秒/次，間隙10秒反復(fù)3~5次。反復(fù)凍融:培養(yǎng)或者分離的細(xì)胞可以用以上的方法勻漿，也可以反復(fù)凍溶3次左右(即讓細(xì)胞加適量的低滲液或者雙蒸水放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，反復(fù)3次左右) ,但有部分酶活力會受影響。取少量組織勻漿做涂片(直接涂片、染色均可)，顯微鏡下觀察細(xì)胞是否磨破，若沒有破則可以延長勻漿時間或增加凍融次數(shù)。
4、將制備好的10%勻漿用普通離心機(jī)或低溫低速離心機(jī)3000r /min左右離心10~15分鐘，若檢測
ATP酶，則只需要1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下，上清棄下面沉淀。