簡要描述:Edu染色服務(wù):EdU是一種胸腺嘧啶核苷類似物,它們能夠在細(xì)胞增殖時(shí)期代替胸腺嘧啶滲入正在復(fù)制的DNA分子,然后分別利用免疫熒光技術(shù)、與Apollo熒光染料特異性反應(yīng)檢測細(xì)胞增殖情況。這是一種新型的非放射性同位素細(xì)胞增殖檢測的方法,在細(xì)胞培養(yǎng),實(shí)體組織及臨床研究中得到了廣泛的應(yīng)用。
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Edu染色服務(wù):實(shí)驗(yàn)步驟
1.將處于對數(shù)生長期的各實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞**消化后,培養(yǎng)基重懸成細(xì)胞懸液,并計(jì)數(shù)。
2.根據(jù)細(xì)胞生長快慢決定鋪板細(xì)胞密度,每組3-5重復(fù),根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)決定鋪板數(shù)量。
3.統(tǒng)一鋪好后,待細(xì)胞沉淀下來后,在顯微鏡下觀察各實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞密度,如果密度不均勻,則固定一組,微調(diào)其他組細(xì)胞的量再次鋪板(如:發(fā)現(xiàn)NC組細(xì)胞較多,降低細(xì)胞量再次鋪板),放入細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
4.鋪板后第一天與第四天,配制2X(20uM)的EDU工作液,將37℃預(yù)熱的2X的EDU工作液等體積加入96孔板中,是EDU終濃度變?yōu)?X,繼續(xù)孵育細(xì)胞2小時(shí),EDU標(biāo)記細(xì)胞完成后,去除培養(yǎng)液,并加入1mL固定液,室溫固定15分鐘,去除固定液,每孔用1mL洗滌液洗滌細(xì)胞3次,每次3-5分鐘,去除洗滌液,每孔用1mL通透液,室溫孵育10-15分鐘,去除通透液,每孔用1mL洗滌液洗滌細(xì)細(xì)胞1-2次,每次3-5分鐘。用內(nèi)源性過氧化物酶封閉液室溫孵育20分鐘,用洗滌液洗滌3次,每次3-5分鐘。
5.EDU檢測:每孔加入50uL的Click反應(yīng)液,室溫避光孵育30分鐘,吸出反應(yīng)液,用洗滌液洗滌3次,每次3-5分鐘。
6.樣品的顯色 :在樣品上加Streptavidin-HRP工作液,室溫孵育30分鐘。 用洗滌液洗滌3次,每次2分鐘。加入0.1ml TMB顯色液,室溫孵育5-30分鐘或根據(jù)顯色情況孵育適當(dāng)時(shí)間。直接在370nm或620-650nm測定吸光度?;蚣尤?5微升2M 終止反應(yīng),隨后在450nm測定吸光度。
Edu染色服務(wù)
伊萊博生物科技(上海)有限公司,公司總部位于上海長江軟件園。2022年1月與上海交通大學(xué)藥學(xué)院成立聯(lián)合研究中心,主要以生命科學(xué)研究為基礎(chǔ),專注于研究成果轉(zhuǎn)化及技術(shù)服務(wù)創(chuàng)新,建立了包含腫瘤生物學(xué)、病理學(xué)、免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)與分子生物學(xué)以及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等學(xué)科的研究服務(wù)體系,為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的發(fā)展做出了重要貢獻(xiàn)。
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