全國(guó)服務(wù)咨詢熱線:

15221734409

肺纖維化動(dòng)物模型

簡(jiǎn)要描述:肺纖維化動(dòng)物模型:肺纖維化( pulmonary fibrosis,PF)是一種間質(zhì)性肺疾病,以巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等炎癥細(xì)胞在肺間質(zhì)浸潤(rùn)、纖維母細(xì)胞增生及纖維結(jié)締組織沉積于肺間質(zhì)致使出現(xiàn)彌散性肺泡炎和肺泡結(jié)構(gòu)紊亂,并最終導(dǎo)致肺間質(zhì)纖維化為特征,是一系列慢性肺部疾病的最終結(jié)局

  • 更新時(shí)間:2024-01-09
  • 廠商性質(zhì):代理商
  • 訪  問  量:583

詳細(xì)介紹

品牌其他品牌

肺纖維化動(dòng)物模型動(dòng)物的選擇


目前,肺纖維化動(dòng)物模型有采用體型較小鼠類(如小鼠、大鼠、倉(cāng)鼠等)和兔。其中 C57BL/6 小鼠、BALA/C 小鼠、KM 小鼠和 ICR 小鼠,Wistar 大鼠和SD 大鼠是用于肺纖維化模型是常用的種類,也有選用體型較大的犬、豬、羊和靈長(zhǎng)類動(dòng)物等,模型選用的動(dòng)物種類因研究目的和造模方法不同而異。


鼠類是較多選用的肺纖維化動(dòng)物模型,體型小、體重輕、價(jià)格便宜,有氣管灌注、霧化吸入、經(jīng)鼻給藥、腹腔注射、靜脈注射等多種給藥方式,是常用的造模動(dòng)物,但因其體型太小不適用于放射影像學(xué)的研究,需要通過解剖摘取肺部進(jìn)行組織病理學(xué)檢查的方法判斷造模是否成功。


豬、猴等大型動(dòng)物體型大,心臟及肺部組織結(jié)構(gòu)與人相似,并且可通過影像學(xué)方法在無創(chuàng)條件下動(dòng)態(tài)觀察動(dòng)物造模情況,但價(jià)格昂貴,操作較復(fù)雜。


造模方法


目前已建立多種誘發(fā)動(dòng)物肺纖維化模型的方法,包括基因相關(guān)模型與非基因相關(guān)模型?;蛳嚓P(guān)模型是指通過基因工程使動(dòng)物成為肺纖維化模型,而非基因相關(guān)模型是指在相同或相似的遺傳背景下,通過環(huán)境因素、藥物毒物或其他因素誘導(dǎo)得到的肺纖維化模型。


一、肺纖維化動(dòng)物模型基因相關(guān)方法致肺纖維化模型


轉(zhuǎn)基因方法包括細(xì)胞因子過表達(dá)法、靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法。


1SD大鼠細(xì)胞因子過表達(dá)法致肺纖維化模型步驟


前期準(zhǔn)備:AdTGF-β1223/225 及腺病毒空載體 -70℃保存,臨用前經(jīng)病毒稀釋液稀釋成 1×109pfu(病毒稀釋液由三種溶液構(gòu)成,其配制方法:A 液:NaCl 8 g,KCl 0.2 g,Na2HPO4 1.15 g,KH2PO4 0.2 g,加雙蒸水定容至100 mL,高壓消毒;B 液:CaCl2·2H2O 0.1 g 定容至 10 mL,高壓消毒;C 液:MgCl2·6H2O 0.1 g 定容至 10 mL,高壓消毒。用前取 98 mL A 液、1 mL B 液、1 mL C 液混合備用。


操作步驟:選用 SD 大鼠,體質(zhì)量(250±15) g,腹腔注射速眠新麻醉(0.4 mL·kg-1),無菌操作,剪開頸部皮膚,鈍性分離頸部肌肉,充分暴露氣管,經(jīng)喉頭下一次性注入 0.4 mL AdTGF-β1223/225 腺病毒液,手術(shù) 6 h 后觀察并記錄動(dòng)物生理反應(yīng)。


模型驗(yàn)證:分別與造模后 d 7、d 14、d 21,麻醉后開胸,左心室插管,先灌流溫?zé)幔ㄊ覝兀┥睇}水,剪開右心耳放血,待流出液變澄清后再緩慢灌流 4% 多聚甲醛水溶液(200 mL·30 min-1)。小心摘取整個(gè)肺和心,經(jīng)氣管恒壓(2 452 Pa)灌注 4% 多聚甲醛固定液 10 min,使肺泡恢復(fù)擴(kuò)張狀態(tài)。沿縱軸切取肺組織浸入 4% 多聚甲醛固定液中固定 24 h,做常規(guī)石蠟包埋、石蠟切片、HE 染色和 Mallory 染色,光鏡觀察、攝片。


2靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法


靶向Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞損傷法是利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)將白喉毒素受體與Ⅱ型肺泡上皮細(xì)胞啟動(dòng)子通過載體融合,白喉毒素不斷刺激轉(zhuǎn)基因小鼠,致肺纖維化。通過敲除特定基因或?qū)胪蛔兓蚴够蛲蛔円材芙⒎卫w維化動(dòng)物模型,與肺纖維化有關(guān)的基因包括:肺表面活性蛋白C、肺表面活性蛋白A2(SFTPA2)、端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(TERT)和端粒酶 RNA復(fù)合酶(TERC)。


轉(zhuǎn)基因方法的優(yōu)勢(shì):基因技術(shù)造模方法比較于傳統(tǒng)造模方法,靶點(diǎn)明確,對(duì)篩選抗纖維化藥物意義重大。除此之外,通過誘導(dǎo)時(shí)間特定啟動(dòng)子,可模擬肺纖維化晚期出現(xiàn)的臨床癥狀。


轉(zhuǎn)基因方法的劣勢(shì):介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因用的病毒載體本身具有潛在危害性,且人類肺纖維化是多基因多種因子作用的結(jié)果,因此單一的基因模型與多基因相關(guān)的肺纖維化模型存在一定差異。


二、非基因相關(guān)方法致肺纖維化模型


常用的非轉(zhuǎn)基因方法主要為物理化學(xué)方法,包括博萊霉su誘導(dǎo)法、平陽(yáng)霉su誘導(dǎo)法、百cao枯誘導(dǎo)法、石棉誘導(dǎo)法、輻射誘導(dǎo)法。化學(xué)誘導(dǎo)法及石棉誘導(dǎo)法通常通過皮下、靜脈注射,或者霧化吸入等途徑給藥,輻射誘導(dǎo)法則直接進(jìn)行射線照射。


1博萊霉su致肺纖維化模型


博萊霉su誘導(dǎo)肺纖維化有氣管內(nèi)一次給藥或多次給藥,也有腹腔給藥、鼻內(nèi)給藥、靜脈給藥、霧化吸入多種方式。氣管內(nèi)一次給藥是常用的造模方式。


1.1 大鼠氣管內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型


步驟:選用健康雄性8~10 周齡 Wistar 大鼠,體質(zhì)量(250±50)g,用 10% 水he氯醛(0.3 mL·100 g-1)腹腔內(nèi)注射麻醉,將大鼠仰臥固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái),開口器固定口腔,拉出舌,用壓she板壓舌腹,在額鏡直視下,趁動(dòng)物吸氣瞬間迅速行氣管插guan(Ф 2 mm,4~5 cm),緩慢注入 5 mg·kg-1BLM 0.2~0.3 mL,立即旋轉(zhuǎn)動(dòng)物,使藥液在肺內(nèi)均勻分布,自由飲水、攝食,d 1、d 14、d 28 采集標(biāo)本。


特點(diǎn):氣管內(nèi)一次給藥法有給藥次數(shù)少、劑量小、制模時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),但動(dòng)物死亡率較高,操作復(fù)雜,急性肺損傷程度重、膠原代謝紊亂的程度輕,病灶分布不均,以支氣管周圍為顯著的特點(diǎn)。目前一次性氣管內(nèi)灌注博萊霉su誘導(dǎo)的動(dòng)物肺纖維化是國(guó)內(nèi)外常用、受認(rèn)可的肺纖維化模型。


1.2 倉(cāng)鼠氣管內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型


步驟:取10 周齡雄性敘利亞倉(cāng)鼠,用生理鹽水配制 1 U 博萊霉su溶液,單次氣管內(nèi)注射 0.1 mL,注射藥物 3 周后,取肺組織進(jìn)行細(xì)胞原代培養(yǎng),3H-TdR 整合實(shí)驗(yàn)評(píng)估成纖維細(xì)胞增殖效果。


特點(diǎn):氣管內(nèi)一次給藥法有給藥次數(shù)少、劑量小、制模時(shí)間短等優(yōu)點(diǎn),但動(dòng)物死亡率較高,操作復(fù)雜,急性肺損傷程度重、膠原代謝紊亂的程度輕,病灶分布不均,以支氣管周圍為顯著的特點(diǎn)。目前一次性氣管內(nèi)灌注博萊霉su誘導(dǎo)的動(dòng)物肺纖維化是國(guó)內(nèi)外常用、受認(rèn)可的肺纖維化模型。


1.3 大鼠腹腔內(nèi)注射博萊霉su致肺纖維化模型


步驟:選用健康雄性 8~10 周齡 Wistar 大鼠,體質(zhì)量(250±50)g,每日腹腔注射 15 mg·kg-1 BLM 10 天,自由飲水、攝食,d 1、d 14、d 28 采集標(biāo)本。


特點(diǎn):腹腔內(nèi)給藥法具有給藥次數(shù)多、劑量大、制模時(shí)間長(zhǎng)等缺點(diǎn),但動(dòng)物死亡率相對(duì)較低,且操作簡(jiǎn)便,急性肺損傷程度較輕、膠原代謝紊亂的程度較重,病灶分布均勻,以胸膜下為顯著的特點(diǎn)。


1.4 小鼠鼻腔滴入博萊霉su致肺纖維化模型


步驟:選用 SPF 級(jí)雌性 ICR 小鼠,6~8 周齡,體質(zhì)量16~18 g,適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周后,鼻腔滴注博萊霉su造模。用yi醚麻醉小鼠,后用微量移液器吸取 50 μL 博萊霉su溶液(15 mg·kg-1 進(jìn)行干預(yù)),經(jīng)鼻腔緩慢滴入小鼠氣管內(nèi),放入鼠籠內(nèi)安置,觀察其造模后一般情況。


產(chǎn)品咨詢

留言框

  • 產(chǎn)品:

  • 您的單位:

  • 您的姓名:

  • 聯(lián)系電話:

  • 常用郵箱:

  • 省份:

  • 詳細(xì)地址:

  • 補(bǔ)充說明:

  • 驗(yàn)證碼:

    請(qǐng)輸入計(jì)算結(jié)果(填寫阿拉伯?dāng)?shù)字),如:三加四=7
伊萊博生物科技(上海)有限公司
地址:上海市寶山區(qū)長(zhǎng)江南路180號(hào)B區(qū)650室
郵箱:yilaibo@shyilaibo.com
關(guān)注我們
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)了解更多信息:
歡迎您關(guān)注我們的微信公眾號(hào)
了解更多信息