miRNA mimics實(shí)驗(yàn)

序列分析表明，至少有1/3的人類基因與miRNA調(diào)控相關(guān)，而且越來越多的試驗(yàn)證據(jù)表明miRNA還有很多功能未被發(fā)現(xiàn)。研究基因的功能通常是將其從基因組中敲除，然后觀察敲除前后的變化，但在破譯miRNA的功能，我們一般不會采用這種策略，而是通過增強(qiáng)或減弱該miRNA的表達(dá)來鑒定其功能。

miRNA mimic能模擬細(xì)胞中內(nèi)源性成熟miRNA的高水平表達(dá)，以增強(qiáng)內(nèi)源性miRNA的調(diào)控作用，是miRNA功能研究的一大利器。miRNA mimic是一種簡單高效的miRNA研究工具，只需用轉(zhuǎn)染試劑包裹即可轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞，無需構(gòu)建載體的繁瑣操作，無需病毒防護(hù)方面的擔(dān)憂，用轉(zhuǎn)染對照即可觀察其轉(zhuǎn)染效率。

miRNA mimic的轉(zhuǎn)染效果，可從靶基因的RNA表達(dá)水平，蛋白表達(dá)水平，細(xì)胞功能等方面檢測。這些實(shí)驗(yàn)?zāi)軌颢@得miRNA的生物學(xué)功能數(shù)據(jù)，及應(yīng)用于miRNA的靶基因驗(yàn)證方面。通常這些實(shí)驗(yàn)涉及到miRNA mimic的轉(zhuǎn)染，或者與報(bào)告基因載體共轉(zhuǎn)。

在MEF細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)染miRNA表達(dá)載體(2ug/mL)或者miRNA mimic(50nM)，48h后檢測miRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示，表達(dá)載體僅能實(shí)現(xiàn)10倍的過表達(dá)，而miRNA mimic可實(shí)現(xiàn)600倍以上的過表達(dá)。對于短期(<1周)的miRNA功能獲得性細(xì)胞研究而言，miRNA mimic是zhd選擇。

從生物學(xué)機(jī)理上來說，miRNA有成為腫瘤標(biāo)志物的優(yōu)勢，它是腫瘤細(xì)胞主動分泌的，隨著腫瘤細(xì)胞的生成、凋零，miRNA的表達(dá)量一直在變化，所以每種miRNA的表達(dá)量代表了在某一刻人類體內(nèi)健康或者疾病的信息。 MiRXES在人體這2000多種miRNA中，他們找出了與胃癌高度相關(guān)的12種miRNA，當(dāng)人體中出現(xiàn)胃癌細(xì)胞時，這12種miRNA在血液中的濃度會出現(xiàn)異常。