RNA-seq實驗

簡要描述：RNA-seq實驗，也叫轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)，就是把mRNA,smallRNA,and NONcoding RNA等等，其中一些用高通量測序技術(shù)把它們的序列測出來，以此來檢測它們的表達水平。

更新時間：2024-05-06
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RNA-seq實驗原理及過程：

轉(zhuǎn)錄組是某個物種或者特定細胞類型產(chǎn)生的所有轉(zhuǎn)錄本的集合。轉(zhuǎn)錄組研究能夠從整體水平研究基因功能以及基因結(jié)構(gòu)，揭示特定生物學(xué)過程以及**發(fā)生過程中的分子機理。

先將樣品提取總RNA，在這之后，除去rRNA（對于真核生物，用帶有Oligo(dT)的磁珠富集mRNA，對于原核生物，用試劑盒去除rRNA），向得到的mRNA中加入Fragmentation Buffer使其片斷成為短片段，再以片斷后的mRNA為模板，用六堿基隨機引物(random hexamers)合成cDNA**鏈，并加入緩沖液、dNTPs、RNase H 和DNA polymerase I 合成cDNA第二鏈，經(jīng)過QiaQuick PCR試劑盒純化并加 EB緩沖液洗脫經(jīng)末端修復(fù)、加堿基A，加測序接頭，再經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳回收目的大小片段，并進行PCR擴增，從而完成整個文庫制備工作，構(gòu)建好的文庫用Illumina HiSeq2000進行測序。

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