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茜素紅染色

簡(jiǎn)要描述：茜素紅染色：成骨分化是干細(xì)胞的一個(gè)重要特性。在特定的誘導(dǎo)培養(yǎng)基作用一段時(shí)間后，干細(xì)胞可分化為成骨細(xì)胞，在細(xì)胞表面沉積鈣鹽，形成鈣結(jié)節(jié)。應(yīng)用茜素紅的復(fù)合物，可用于鑒定干細(xì)胞是否已成功向成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)化。

  • 更新時(shí)間：2025-02-28
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詳細(xì)介紹

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一、染色步驟

  1. ?樣本固定?

    • 成骨誘導(dǎo)分化結(jié)束后，吸去培養(yǎng)基，用1×PBS輕柔洗滌細(xì)胞2~3次?23。

    • 加入4%多聚甲醛或10%福爾馬林固定液，室溫固定30分鐘?12。

  2. ?洗滌與風(fēng)干?

    • 去除固定液后，用蒸餾水或1×PBS沖洗3次以去除殘留固定劑?12。

    • 風(fēng)干載玻片或培養(yǎng)板，確保樣本干燥?34。

  3. ?染色處理?

    • 加入0.1%茜素紅染色液（溶于0.05M Tris-HCL緩沖液，pH8.3），37℃孵育5-30分鐘（時(shí)間依鈣鹽含量調(diào)整）?12。

    • 染色后迅速用蒸餾水沖洗，避免染料殘留導(dǎo)致背景過深?23。

  4. ?復(fù)染與觀察?

    • 可選固綠染色液復(fù)染1分鐘以增強(qiáng)背景對(duì)比度?34。

    • 顯微鏡下觀察：鈣結(jié)節(jié)呈橙紅色，背景為綠色或粉紅色?23。

  5. ?保存?

    • 染色后樣本用封口膜密封，4℃保存可維持染色效果2周?23。

二、關(guān)鍵注意事項(xiàng)

  1. ?操作輕柔?

    • 避免劇烈震蕩或長(zhǎng)時(shí)間暴露于液體中，防止鈣結(jié)節(jié)脫落?12。

  2. ?染色條件優(yōu)化?

    • 染色液使用前需恢復(fù)至室溫，染色時(shí)間根據(jù)鏡下鈣鹽沉積量動(dòng)態(tài)調(diào)整（通常5-10分鐘）?23。

    • 染色過深時(shí)可用1%鹽酸酒精分色?4。

  3. ?試劑選擇?

    • 推薦使用商品化茜素紅S試劑（如Beyotime ST1078-5g），純度穩(wěn)定?5。

    • 固定劑優(yōu)先選擇中性福爾馬林，避免酸性條件干擾鈣鹽結(jié)構(gòu)?24。


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