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裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建

簡要描述:裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建:裸鼠腫瘤模型是比較常見和常用的一種腫瘤動物模型,它在皮下移植瘤腫瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠腫瘤模型的接種一般有細(xì)胞接種和瘤塊接種兩種方式,接種取材有手術(shù)活檢標(biāo)本、癌性胸腹水標(biāo)本和體外培養(yǎng)的細(xì)胞系三種。

  • 更新時間:2024-07-31
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裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建動物選擇

如果需要構(gòu)建一個同源的腫瘤模型,應(yīng)該選擇相同基因的小鼠品系,如C57BL/ 6和Balb/ c,前者是廣泛使用的實驗室嚙齒動物,因為它既健壯又容易繁殖。然而,如果需要構(gòu)建異種腫瘤移植模型,則需要使用免疫缺陷小鼠。其中包括胸腺不全的裸鼠、免疫缺陷型小鼠(SCID)、 NOD /SCID等小鼠。NSG小鼠缺乏成熟的T細(xì)胞、B細(xì)胞和最自然的殺傷活性;它們在先天免疫和細(xì)胞因子信號通路中也有許多缺陷。一般來說,小鼠的免疫缺陷越嚴(yán)重,腫瘤移植率最高。



裸鼠皮下成瘤模型構(gòu)建造模方法

1、細(xì)胞是貼壁細(xì)胞,細(xì)胞培養(yǎng)在 RPMI-1640 培養(yǎng)基中,含 10%胎牛血清,100U/mL 的青mei素,100ug/mL 的鏈mei素,培養(yǎng)在 37℃含 5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。
細(xì)胞傳代培養(yǎng):當(dāng)細(xì)胞長至 80-90%時,去除培養(yǎng)基,加入 PBS 洗 1-2 次,去除 PBS后,加入 1ml 胰mei消化 1-3min 后,加入 3ml wan全培養(yǎng)基中和胰mei終止消化,將消化的細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中,1000rpm 離心 5min。倒掉上清后,加入 3ml 培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,1:3 傳代至培養(yǎng)皿中培養(yǎng)。
2、將長到培養(yǎng)皿 80%-90%的細(xì)胞用胰mei消化下來,1000rpm 離心,去除上清,加入wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,將細(xì)胞分別種在 6 孔板中,每孔種 1×105個細(xì)胞。
3、待細(xì)胞貼壁后,按照 MOI=1:10 的比例加入慢病毒感染細(xì)胞,感染 24h 后,去除含病毒的培養(yǎng)基,加入wan全培養(yǎng)基。培養(yǎng) 48h 后,加入 puromycin 進(jìn)行篩選。
4、將細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)。待細(xì)胞長到zhi定數(shù)量時,將細(xì)胞用胰mei消化下來,1000rpm離心后,去除上清,加入 PBS 將細(xì)胞洗一遍,再次加入 PBS 重懸,對細(xì)胞進(jìn)行計數(shù),將數(shù)量調(diào)整為 2×107個細(xì)胞/ml。
5、8周齡15只裸鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后,隨機(jī)分為3組,每組分別在右腋皮下接種2×106(100ul/只)細(xì)胞(細(xì)胞分為對照組細(xì)胞即未處理的細(xì)胞,NC 組細(xì)胞即感染 NC 病毒的細(xì)胞,shRNA 細(xì)胞即感染 sh-RNA 病毒的細(xì)胞)。接種約兩周后出現(xiàn)腫瘤結(jié)節(jié),每周用游標(biāo)卡尺測量腫瘤大小兩次。將裸鼠放入鼠籠中正常飼養(yǎng) 4 周后處死裸鼠,取裸鼠腫瘤拍照凍存。


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