簡要描述:PDX模型:用于腫瘤研究的動物模型主要包括人源異種移植模型(PDX)、細胞系移植瘤模型(CDX)和遺傳工程小鼠模型(GEMM)。
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PDX模型構建方法
首先腫瘤組織標本應在含有胎牛血清(FBS)、青霉su/鏈霉su的冷溶液中制備,以提高移植的成功率。PDX所用的腫瘤組織有兩種形式,病人腫瘤組織切成的2-3mm3碎片或者單細胞懸液。腫瘤標本在移植前用上述溶液洗滌三次。在4-8周齡免疫缺陷小鼠的下背部創(chuàng)建小切口用于皮下移植,并將腫瘤組織樣本移植到手術區(qū)域。當腫瘤大小達到1-2cm3時意味著移植成功,平均需要2-4個月,如果在6個月內(nèi)沒有發(fā)現(xiàn)腫瘤,移植就沒有成功。移植瘤長到足夠大時可以再解剖重新移植到其他小鼠,第一代為F1,第二、三代為F2、F3。第三代(F3)及以上小鼠可用于藥物治療研究。
構建PDX模型的步驟
位置選擇
PDX移植效率因腫瘤類型、植入部位、腫瘤侵襲性和受體小鼠類型而異,腫瘤組織可以移植到腎包膜下、皮下、原位。一般來說,皮下和原位部位都是常用的。皮下移植:皮下移植是目前常用的移植手段,這種模型提供了腫瘤細胞的異質性,很少發(fā)生轉移,而且較好地模擬了最初的腫瘤微環(huán)境。腫瘤植于皮下,易于觀察和測量腫瘤的生長情況,操作相對簡單,技術難度不高。對于消化系統(tǒng)腫瘤,如結腸癌、胃癌和食管癌等,皮下移植往往有較高的成功率。腎包膜下移植:腎包膜下具有豐富的血管結構,能夠提供充足的營養(yǎng)、激素和氧氣促進早期腫瘤組織生長,并保留原發(fā)腫瘤的異質性和遺傳特征,可以極大地提高腫瘤移植的成功率。但是缺點是對實驗人員有很高要求,需要豐富的外科手su經(jīng)驗。此外,腫瘤的大小不易觀察和測量。原位移植:原位異體移植PDX模型(PDOX)可以產(chǎn)生轉移,準確模擬原發(fā)腫瘤的自然環(huán)境,通常用于轉移瘤的研究。
小鼠選擇
PDX模型的受體是具有免疫缺陷的小鼠,目前常見的可用于PDX模型的小鼠品系有四種,其各自特點如下:裸鼠:裸鼠(nude mice)無胸腺,缺乏成熟的T細胞,B淋巴細胞功能較低,免疫球蛋白G含量低下,因此具有較低的免疫力,移植排斥少。SCID小鼠:SCID小鼠是由于第16號染色體上的隱性基因發(fā)生突變而產(chǎn)生的。
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