流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度

簡(jiǎn)要描述：流式檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度流式細(xì)胞術(shù)測(cè)量鈣離子的熒光探針大都是鈣螯合劑EDTA的衍生物，有較高的量子產(chǎn)量，并對(duì)鈣有較高的特異性親合力。鈣離子流式熒光探針本身不能透過(guò)細(xì)胞質(zhì)膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，將它們連潔乙酰甲酯后，可將染料導(dǎo)入細(xì)胞，經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的非特異性酯酶水解水解該酯鍵，釋放出染料分子，恢復(fù)為不能通過(guò)細(xì)胞膜的游離酸形式，進(jìn)而與細(xì)胞內(nèi)鈣結(jié)合。通過(guò)熒光強(qiáng)度可以敏感地檢測(cè)出鈣離子濃度。

更新時(shí)間：2024-06-17
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1.Fluo/Am儲(chǔ)存液配制：將Fluo/Am溶于DMSO，配成終濃度為2mmol/L的儲(chǔ)存液，分裝，-70度凍存。
2.懸浮細(xì)胞染色：收集細(xì)胞并調(diào)整細(xì)胞濃度至2*10^6個(gè)/ml，加Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L,置于，5%CO2。37度避光，孵育30-60min，其間輕輕振蕩幾次，并設(shè)置陰性對(duì)照（不加Fluo/Am）。
3.貼壁細(xì)胞染色：以5*10^5個(gè)細(xì)胞種植于24孔培養(yǎng)板中，置于5%CO2。37度培養(yǎng)一段時(shí)間，加入Fluo/Am至終濃度為5-10umol/L，置于5%CO2。37度避光，孵育30-60min。其間輕輕振蕩幾次，并設(shè)置陰性對(duì)照。
4.取出細(xì)胞或消化細(xì)胞，離心1500r/min 10min，去除多余染料，再用無(wú)鈣緩沖液沖洗PBS反復(fù)離心洗滌2次，最后用無(wú)鈣PBS重懸至0.5ml。
5.進(jìn)行流式檢測(cè)分析
結(jié)果分析：用488mm激發(fā)，F(xiàn)LI-H熒光通道收集熒光信號(hào)，收集1*10^4個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞內(nèi)鈣的濃度用平均熒光表示。

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